【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：結核分枝桿菌抗體（IgG）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規(guī)格】
48人份/盒、96 人份/盒。
【預期用途】
本產(chǎn)品用于定性檢測人血清或血漿中結核分枝桿菌抗體(IgG)。
本產(chǎn)品檢測結果僅供臨床參考，不得作為確診或排除的唯一依據(jù)。ELISA檢測結核病患者抗體還不能嚴格區(qū)分是近期感染、既往感染，還是隱性感染，尚不能作為療效考核的依據(jù)。但活動性肺結核抗結核抗體陽性率明顯高于既往結核分枝桿菌感染患者，兩組之間陽性率具有顯著差異，說明血清或血漿中結核抗體檢測對于鑒別活動性肺結核和既往結核分枝桿菌感染患者具有輔助診斷價值。
【檢驗原理】
本品由基因重組表達的結核分枝桿菌多表位融合抗原包被酶聯(lián)板，加待測血漿或血清，如待測樣品中存在結核抗體，形成抗原抗體特異結合，再加入抗人IgG 酶標抗體與其反應 ，經(jīng)酶底物顯色，以顏色的深淺判斷樣品中結核抗體。
【主要組成成分】
（1） TB-抗原包被板 1塊 96人份 1塊48人份
（2） 酶結合物 20mL×1瓶 6mL×1瓶
（3） 陽性對照 1mL×1瓶 1mL×1瓶
（4） 陰性對照 1mL×1瓶 1mL×1瓶
（5） 洗滌液（用前1：20稀釋） 50mL×1瓶 30mL×1瓶
（6） 顯色劑 A 6mL×1瓶 3mL×1瓶
（7） 顯色劑 B 6mL×2瓶 3mL×1瓶
（8） 終止液 6mL×1瓶 3mL×1瓶
（9） 樣品稀釋液 20mL×1瓶 6mL×1瓶
（10）不干膠片 3張 3張
試劑組成：
組份2酶結合物：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；復合酶穩(wěn)定劑AES 0.6g/L；辣根過氧化物酶保護劑1.0g/L；小牛血清 500mL/L；山羊血清 500mL/L；指示劑1 1.3mL/L；硫柳汞1g/L；抗-TB-HRP適量。
組份3陽性對照：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；乙二醇 150mL/L；小牛血清 250mL/L；硫柳汞1g/L；指示劑1 1.25mL/L；陽性血清適量。
組份4陰性對照：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；乙二醇150mL/L；硫柳汞1g/L；陰性血清250mL/L。
組份5洗滌液: NaCL 160g/L；Na2HPO4.12H2O 58g/L；KCL 4g/L；KH2PO4 4g/L；Tween-20 10mL/L。
組份6顯色劑A：檸檬酸8g/L；8-羥基喹啉0.004g/L；冰醋酸2.4mL/L；過氧化尿素0.7g/L。
組份7顯色劑B：檸檬酸2.1g/L；乙二胺四乙酸二鈉0.38g/L；TMB 0.4g/L。
組份8終止液：濃硫酸110mL/L。
組份9樣品稀釋液：Tris Base 2.4g/L；NaCL 17.8g/L；酪蛋白鈉5g/L；牛血清白蛋白2g/L；吐溫-20 1mL/L；曲拉通X-100 1mL/L；山羊血清50mL/L；硫柳汞0.4g/L。
需要但未提供的物品：新鮮的蒸餾水或去離子水、一次性手套、精確的微量移液器和潔凈的吸頭、干凈的吸水紙、37℃恒溫箱或水浴鍋、計時器、洗板機或洗瓶、振蕩器。
【儲存條件及有效期】
2～8℃保存，有效期12個月。
生產(chǎn)日期及有效期見標簽。
【適用儀器】
自動酶標測定儀，波長：450nm
【樣本要求】
（1）樣本采集不需要特殊準備，不需要受檢者禁食。
（2）樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會影響實驗結果。
（3）高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本以及有微生物污染的樣本會引起錯誤的結果，可導致假陽性率上升。
（4）盡可能采用新鮮血檢測，樣本保存在室溫下不要超過8小時。
（5）如果不能在8小時內(nèi)完成檢測，請將樣本置2～8℃冷藏保存；如果不能在48小時內(nèi)完成檢測，或者需要將樣本進行運輸，請將樣本置-20℃或更低溫度冷藏。
（6）冷凍樣本在解凍之后，檢測前必須充分混勻；樣本應避免反復凍融，否則會造成樣本中IgG蛋白聚合，可導致假陽性率上升，也可導致真陽性檢出率下降。
【檢驗方法】
（1）每次試驗設陰性、陽性對照各兩孔、分別加入陰、陽性對照血清100μL，再設一孔空白對照，加樣品稀釋液100μL。其余孔加入100μL樣品稀釋液，再加待測血清10μL。充分混勻后，置37℃溫育30分鐘。棄去孔內(nèi)樣品，扣干。
（2）用洗滌液注滿每孔（至少300μL洗滌液/孔），勿溢出，靜置5秒鐘后扣干，重復5次。
（3）每孔加酶結合物100μL（空白對照孔除外），置37℃溫育20分鐘，同上法洗反應板5次。
（4）每孔加顯色劑A液、B液各50μL，輕輕振蕩后，37℃避光靜置10分鐘。
（5）每孔加入終止液50μL終止反應，以空白調(diào)零，在酶標儀中讀取各孔OD450。
【檢驗結果的解釋】
（1）測定：以酶標儀單波長450nm 或雙波長450nm/630nm測定各孔OD值。（用單波長測定時需設空白對照孔。）
陽性對照每孔OD值≥0.8；0.00< 陰性對照OD值≤0.12。
（2）臨界值（Cutoff）計算：陰性對照平均OD值＋0.12。
備注：陰性對照OD值低于0.06，以0.06計算，高于0.06按實際值計算。
(3) 結果解釋:樣品OD值≥臨界值（Cutoff）為結核抗體陽性；樣品OD值﹤臨界值（Cutoff）為結核抗體陰性。
【檢驗方法的局限性】
本品僅用于檢測血清或血漿中結核抗體，用于體外檢測，結核病人輔助診斷。
【產(chǎn)品性能指標】
（1） 結核分枝桿菌抗體企業(yè)參考品檢定結果：
|
|
陰性參考品符合率 |
陽性參考品符合率 |
靈敏度參考品 |
|
TB參考品 |
≥90% |
100% |
合格 |
（2）對臨床400例標本檢測結核分枝桿菌抗體檢測結果：
肺結核病人標本：（122+104）/252×100%=89.68%
結核性胸膜炎病人標本：（7+15）/27×100%=81.48%
肺外結核病人標本：（2+13）/21×100%=71.4%
總敏感度病人標本：（122+104+7+15+2+13）/(252+27+21)×100%=87.67%
特異性：（100-7）/100×100%=93%
總樣本符合率：（263+93）/400×100%=89.00%
（3）檢測試劑盒對類風濕關節(jié)炎，紅斑狼瘡，甲狀腺異常，糖尿病以及肺部感染患者樣本進行測定的試驗，以觀察與相關疾病交叉反應性。結果在163例樣品中假陽性率為8%。與文獻報道假陽性率4.6-11.3%基本一致；說明試劑與上述疾病具有一定的交叉反應性，另外也可能與受試者生活在結核病高度流行環(huán)境，個體隱性感染有關，但目前沒有發(fā)病，特別是肺部感染疾病。
（4）主要干擾物高血脂（甘油三酯濃度含量不高于2.1mmoL/L）、高膽固醇（膽固醇濃度含量不高于8.5mmoL/L）和血紅蛋白（血紅蛋白濃度不高于210g/L）對本品的干擾試驗結果表明，三種干擾物均不影響本品的檢測結果。
【注意事項】
（1）濃縮洗滌液使用前，用蒸餾水稀釋20倍后使用。
（2）不同批號試劑不可混合使用。
（3）必須嚴格控制溫育反應板的溫度和時間。
（4）結果判定以儀器測定為準，不能憑肉眼觀察。
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